GTP酶
GTPase
GTPase-Glo™ Assay可分析GTPase的内在活性、GAP激活的GTPase活性、GAP和GEF。该方法测定了GTPase反应后剩余的GTP,检测试剂将GTP转化为ATP,然后对生成的ATP进行生物发光检测。
GTPase-Glo™Assay的作用原理
上图. Ras的GTPase活性和NF1-333 (GAP)介导的Ras的GTPase活性。用2μM野生型或突变型Ras、1μM NF1-333和5μMGTP在含有1mM DTT的GTPase/GAP缓冲液中组装反应体系,最终反应体积为10μL。将该反应溶液在室温下孵育90分钟。之后加入10μL GTPase-Glo™ Reagent 并在室温下孵育30分钟。添加检测试剂(20µL),将培养板在室温下孵育5-10分钟,并使用 GloMax® Discover System记录发光信号。
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