蛋白相互作用_RAS通路_小分子药物研发_应用

: RAS通路

RAS Pathway

选择合适的检测方法对RAS信号通路药物开发研究非常重要。Promega可为您提供多种检测试剂盒和先进技术来助力RAS药物的研发。这些检测试剂盒可检测化合物与通路组分的结合，并评估它们对蛋白质相互作用、蛋白质水平以及最终ERK激活的影响。

NanoBRET^® 技术

NanoBRET^® 技术能够灵敏、可重复地检测天然细胞环境中的蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）。使用低水平表达的全长蛋白质能够进行PPI的监测和筛选研究，而这些研究可以反映真实的细胞生理学水平。与传统BRET检测相比，明亮的蓝移供体信号和红移受体可产生最佳的光谱重叠、信号增加且背景干扰较低。

NanoBRETPPI检测的基本原理

您可以阅读以下有关NanoBRET^® 技术的文献，了解更多信息：

下载海报，了解如何使用 NanoBRET^® PPI 技术研究 RAS 通路。

上图. 可涵盖RAS和RAF基因家族成员的NanoBRET^® 检测，用于研究通路中蛋白质相互作用的抑制和/或诱导。RAS:RAF动力学检测 +/-BI-2852抑制剂（左图）；RAF二聚化检测显示GDC0879的诱导（右图）。

上图. 抑制KRAS WT:SOS1cat结构域相互作用。通过BI-3406和BAY-293的剂量响应处理，SOS1的催化结构域与KRAS WT分离。

NanoLuc^® Binary Technology（NanoBiT）是一种基于NanoLuc^®萤光素酶的二亚基系统，可用于活细胞中PPI的细胞内检测。这个图片和简短的视频阐明了该技术的作用原理。

如需了解更多关于使用NanoBiT^®技术研究RAS信号通路中的蛋白质相互作用, 可点击此处下载技术资料, 其中展示了来自野生型和突变型KRAS与CRAF 或 BRAF结合的数据。
阅读本文，了解 NanoBiT^® 技术的起源: Dixon, A. S. et al. (2016). NanoLuc Complementation Reporter Optimized for Accurate Measurement of Protein Interactions in Cells. ACS Chemical Biology. p. 400-408

上图. NanoBiT^® Assays 监测KRAS 4B野生型和突变型与RAF亚型的相互作用。 KRAS 4B和CRAFRBD结构域 (图 A); KRAS 4B 和全长CRAF (图B); KRAS 4B和全长BRAF (图C)。

上图. EGF处理后，实时监测在血清饥饿的HeLa细胞中KRAS 4B (野生型)：CRAF (全长)相互作用。

Promega可提供一系列NanoLuc^®, HaloTag^®, NanoBiT^® 和 BiBRET载体帮助您开始您的蛋白互作研究。点击下方按钮查看所有可用于检测活细胞中RAS通路相互作用的检测方法。下载 PDF

上图. 在Lumit^® Anti-Tag Protein Interaction Reagents中，链霉亲和素和抗常见标签的抗体分别用LgBiT和SmBiT标记。当两个带不同标签的蛋白质结合时，可以使用相应的SmBiT-和LgBiT-偶联抗体检测相互作用。

KRAS（G12C）/RBD-cRAF 与 AMG510 的相互作用

KRAS（G12C）/RBD-cRAF 相互作用的动力学

上图. Lumit^® KRAS-cRAF Assay可用于测试小分子抑制剂对 KRAS 突变体组的特异性。

上图. KRAS的激活周期可以在体外重建，并且在小分子抑制剂存在下可以监测KRAS/cRAF结合的动力学，作为SOS1介导的GDP/GTP交换的响应。