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GPCR信号通路研究
GPCR Research
目前，FDA 批准上市的临床药物中，约三分之一的药物作用于 GPCRs 发挥治疗作用，GPCRs 被认为是新药研发领域中最重要，也是最有应用前景的药物靶点之一。Promega提供易于操作的基于生物发光的检测技术，探索如何精准测量GPCR信号通路级联中每一步的细胞响应。
cAMP检测
cAMP Assays
cAMP的高通量筛选
Lumit®技术提供了一种快速、免洗的生物发光方法用于测量cAMP。这种均相检测简化了工作流程，最大限度地减少了干扰，并可在几分钟内提供准确的高通量结果。
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| Lumit® cAMP检测实验示意图。在没有游离cAMP的情况下（上图），cAMP连接的示踪剂与一抗结合，使得与LgBiT偶联的二抗能够产生最大发光信号。在存在游离cAMP的情况下（下图），竞争反应减少了示踪剂与一抗的结合，导致发光信号降低。了解更多信息，请参阅该海报： A bioluminescent and homogeneous assay for monitoringGPCR-mediated cAMP modulation and adenylate cyclase activity 。 | 调节GPCR DRD1活性后的cAMP检测。HEK293细胞稳定转染DRD1，并用DRD1激动剂多巴胺处理，导致cAMP水平升高。详见该已发表文章：A bioluminescent and homogeneous assay for monitoring GPCR-mediated cAMP modulation and PDE activity |
在细胞裂解液中测量细胞内cAMP
cAMP-Glo™ Max检测是一种灵敏且可重复的生物发光检测方法，用于测量细胞内cAMP。它适用于多种样本和高通量形式，具有延长的信号稳定性，并最大限度地减少干扰，从而提供可靠的结果。
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| 使用cAMP-Glo™ Max检测法对 forskolin 进行浓度滴定实验。在白色侧壁透明底384孔板中，2,000个HEK293细胞暴露于指定浓度的forskolin。 | 使用cAMP-Glo™ Max检测法测定表达D1受体的HEK293细胞中SCH23390的IC50值。细胞在100nM激动剂SKF38393存在的情况下，用拮抗剂SCH23390处理。 |
活细胞中cAMP的实时检测
GloSensor™技术提供了一个基于萤光素酶的灵活生物传感器平台，用于实时检测活细胞中的信号事件，具有高灵敏度、线性度和特异性。其宽广的动态范围可检测高达500倍的光输出变化。极高的灵敏度使其能够在不依赖化合物（如forskolin）人工刺激的情况下，检测Gi偶联受体的激活或反向激动剂活性。
GloSensor™ cAMP检测概述。基因编码的生物传感器变体包含与北美萤火虫（ Photinus pyralis）萤光素酶突变体融合的cAMP结合域。当与cAMP结合时，构象变化发生，从而显著增加光输出。
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| 实时Gαs信号监测。HEK293细胞瞬时转染pGloSensor™-22F cAMP质粒，并按图示用化合物处理。 | 灵敏度足以在不使用forskolin的情况下检测反向激动剂。表达多巴胺D1受体的HEK293细胞瞬时转染pGloSensor™-22F cAMP质粒，并在28°C下用10µM化合物处理。 |
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