GPCR信号通路研究

GPCR Research

目前，FDA 批准上市的临床药物中，约三分之一的药物作用于 GPCRs 发挥治疗作用，GPCRs 被认为是新药研发领域中最重要，也是最有应用前景的药物靶点之一。Promega提供易于操作的基于生物发光的检测技术，探索如何精准测量GPCR信号通路级联中每一步的细胞响应。

技术介绍手册
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蛋白磷酸化
Protein phosphorylation
GPCRs 在被配体激活后，主要通过下游的 G 蛋白或 arrestin 通路行使特定的生理功能。然而，GPCRs在招募 arrestin 蛋白之前， 必须被 GPCR 激酶（GPCR Kinases，GRKs）识别和调控。多项研究证实， Lumit® Immunoassay Cellular Systems 可用于细胞中的激酶信号通路分析。特别是因磷酸化介导的信号转导。

Lumit®免疫检测

Lumit® 的基本原理是 NanoLuc® 二亚单元系统 (NanoBiT® )。在 Lumit® 免疫分析中，两种抗体分别用 NanoLuc® 萤光素酶的小亚基和大亚基 ( 即 SmBiT 和 LgBiT) 进行化学标记。直接或间接与分析物结合产生标记抗体的空间接近性，使 SmBiT 和 LgBiT 能够重组形成 NanoBiT® 萤光素酶。在其底物 furimazine 的存在下，可以检测到明亮的发光，发光值与样品中待测物量成正比。



Lumit® Immunoassay Cellular Systems 


使用间接的 Lumit® 检测模式，将两种一抗与预先标记 LgBiT 或 SmBiT 亚基的两种匹配二抗进行混合以检测靶标蛋白质。一抗 / 二 抗复合物与各自相应表位的结合使 NanoBiT® 大小亚基紧密相邻，形成了有活性的萤光素酶，该酶产生的光信号与靶标蛋白质的量成正比。


Promega 提供 20 多种预验证目标蛋白的应用说明列表，以节省检测时间和人力。应用说明包含靶标特异性操作步骤、代表性数据以及使用的市售一抗抗体信息。请访问 Promega 官方网站浏览最新的应用说明：

www.promega.com/LumitCellularSystems







使用Lumit® Immunoassay Cellular Systems 检测总的和磷酸化-CREB (Ser 133)

PKA 信号通路的激活与抑制。(A) 将 50,000 个接种的 HepG2 细胞饥饿处理过夜。随后，对这些细胞不予处理或用不同浓度的 Forskolin 处理 30 分钟，然后使用 Lumit® Immunoassay Cellular System – Set 1 检测磷酸化 CREB 的水平，以确定 Forskolin 的 EC50 值。(B) 饥饿处理后，50,000 个接种的 HepG2 细胞先用不同浓度的 Staurosporine 预处理 1 小时，然后用 Forskolin（30μM）处 理 30 分钟，接着使用 Lumit® Immunoassay Cellular System – Set 1 检测磷酸化 CREB 的水平，以确定该抑制剂的效力（IC50）。

电话：010-58256268

技术支持邮箱：chinatechserv@promega.com

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